四大色谱原理(各种色谱法的原理)

五大色谱法原理?

液相色谱法按分离机制的不同分为

1.液固色谱法:使用固体吸附剂,被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离。

2.液液色谱法:使用将特定的液态物质涂于担体表面,或化学键合于担体表面而形成的固定相,分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。

3.离子交换色谱法:固定相是离子交换树脂,常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架,在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基(称阳离子交换树脂)或季氨基(阴离子交换树脂)。

4.离子对色谱法:又称偶离子色谱法,是液液色谱法的分支。它是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后,在非极性固定相中溶解度增大,从而使其分离效果改善。主要用于分析离子强度大的酸碱物质。

5.排阻色谱法:固定相是有一定孔径的多孔性填料,流动相是可以溶解样品的溶剂。小分子量的化合物可以进入孔中,滞留时间长;大分子量的化合物不能进入孔中,直接随流动相流出。

HPLC的分类?

HPLC可分为以下六类。

亲和色谱:主要利用样品与固定性之间的亲和性,实现分离。

离子交换色谱:基于固定相与流动相的带电基团发生可逆交换,达到分离目的。离子交换树脂用于分离含有带电离子的样品。对于阴离子,使用阴离子交换树脂;对于阳离子,使用阳离子交换树脂。主要用于分离酸性和碱性化合物。

离子对色谱:在反相色谱的流动相或固定相中加入离子配对剂,与样品中可电离的成分形成“对离子”。常用的离子配对剂有戊烷、己烷、庚烷或辛烷磺酸盐等。

吸附色谱:是利用吸附性不同的原理,根据样品中的组分对固定相的亲和力不同而发生分离。

空间排阻色谱:按样品中的组分的分子大小顺序进行分离。色谱柱是由琼脂糖、葡聚糖、聚丙烯酰胺等软凝胶制成,也可用烷基葡聚糖、聚苯乙烯等半刚性凝胶。

手性色谱:用于分离样品中的光学活性异构体。固定相采用化学键合硅胶。常应用于医药、生物等领域。

离交柱原理?

离交柱是指离子交换色谱中的固定相中的一些带电荷的基团,这些带电基团通过静电相互作用与带相反电荷的离子结合。

基本原理:离子交换色谱是蛋白纯化技术中常用的一种纯化方法,其原理是指被分离物质所带的电荷可与离子交换剂所带的相反电荷结合,这种带电分子与固定相之间的结合作用是可逆的,在改变pH或者用逐渐增加离子强度的缓冲液洗脱时,离子交换剂上结合的物质可与洗脱液中的离子发生交换而被洗脱到溶液中。

由于不同物质的电荷不同,其与离子交换剂的结合能力也不同,所以被洗脱到溶液中的顺序也不同,从而被分离出来。

离子交换色谱分离原理?

离子交换色谱(ion exchange chromatography,IEC)以离子交换树脂作为固定相,树脂上具有固定离子基团及可交换的离子基团。

当流动相带着组分电离生成的离子通过固定相时,组分离子与树脂上可交换的离子基团进行可逆变换。根据组分离子对树脂亲合力不同而得到分离。

离子交换色谱的选择?

离子交换色谱法的固定相为离子交换剂,常用的有离子交换树脂和化学键合离子交换剂。经典离子交换色谱法的固定相为离子交换树脂,其缺点是易于膨胀,传质较慢,柱效低。不耐高压。HPLC中的固定相是键合在薄壳型和多孔微粒硅胶上的离子交换剂,其机械强度高,不溶胀,耐高压,传质快,柱效高。

离子交换色谱法的流动相是具有一定pH值和离子强度的缓冲溶剂,或含有少量有机溶剂,如乙醇、四氢呋喃、乙腈等,以提高色谱选择性。

离子交换色谱和大小色谱有什么区别?

离子交换色谱是利用物质所带电荷的差别来进行分离的,而大小色谱则是利用物质分子大小不同来进行分离的。

离子交换色谱法对选择性有影响?

离子色谱是利用相反电荷之间的相互作用来分离的,当检测物质带负电荷时,要选择阴离子色谱柱,阴离子色谱柱带正电荷的配基,进行阴离子-阳离子交换,结合带负电荷的分子,经过交换后检测物质的带负电荷的分子就会吸附色谱柱上,然后在用高盐洗脱,洗脱的组分先后进入检测器,就达到了检测的目的。

当检测物质带正电荷时,道理类似,自己想吧。

pH梯度可以改变检测物质电荷、偏离等电点的程度,从而影响带正/负电荷的分子(或离子)与色谱柱的结合能力(可以认为是牢固程度),洗脱时的难易程度就改变,从而改变了分离选择性。

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