qq名字网离子交换层析
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离子交换层析常见问题解析
摘要：我们都知道在试验成功的背后都有很多不为人知的心酸，但如果你不自己亲身体验，你就永远只是知道，永远都是站在巨人肩膀上的矮子。本文就是根据自身实验经验总结。望留言批评指正！01 如何根据蛋白pI选择离子交换填料
a. 缓冲液 pH≥目的蛋白pI 0.5-3个单位选择弱阴离子交换填料(DEAE)
b. 缓冲液 pH≥目的蛋白pI 3个蛋白以上选择强阴离子交换填料(Q)
c. 缓冲液 pH≤目的蛋白pI 0.5-3个单位选择弱阳离子交换填料(CM)
d. 缓冲液 pH≤目的蛋白pI 3个单位以上选择强阳离子交换填料(SP)
e. 缓冲液中含有较高离子强度时选择复合型离子交换填料(MMC/MMA)
?根据pI选择只能做为参考，不能完全依据pI选择，因为蛋白是局部电荷和离子交换填料以静电力的形式结合。
02 如何根据填料基质选择合适载量的离子交换填料
a. 最高载量的就选择葡聚糖交流琼脂糖基质的填料（XL）
b. 常规载量的就选择琼脂糖基质的填料（FF/HF）
03 如何选择合适流速和分辨率的填料
根据离子交换填料的粒径分布选择，原则上粒径越小分辨率越高。
a. 快速捕获选择流速大的（BB 165-300um)
b. 初步纯化选择粒径适中的（FF 45-165um)
c. 精细纯化或者科研用选择高分辨率的（HP 25-45um)
?同一材料基质的填料，粒径越小反压越大，流速越小
04 汇研生物离子交换填料推荐
a. XL基质的离子交换填料有很高的载量，其分辨率和FF基质的相当，但载量很高，在工业生产中有明显的载量优势，明显的成本优势。
b. HPR基质的离子交换填料，具备高分辨率，高流速，高载量，高回收率等众多优势，其在处理比较复杂的样品时有显著优势。
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汇研生物05 离子交换层析缓冲液的选则
用Tris-HCl还是PB，选择的依据是蛋白质的稳定性和活力在哪个缓冲液中好，浓度一般10-50mM，但是缓冲液应与样品缓冲液有相同的pH和离子强度。
06 纯化时目标蛋白不结合或结合量较低
a. 孵育时间太短：降低上样量和上样流速。
b. 填料中沉积的杂质太多，导致填料结合能力下降：及时对填料进行清洗
c. 缓冲液不合适：优化缓冲液离子强度和pH
d. 目的蛋白和填料带相同电荷：更换填料或者优化缓冲液
e. 填料没平衡好，未完全解离：增加平衡柱体积数及优化缓冲液
07 目标物纯度较低
a. 样品复杂或者前处理不到位：层析前离心或过滤处理样品，或者优化层析体系，选择合适的离子交换填料和层析体系（缓冲液）
b. 样品粘度态高：用缓冲液适当的稀释样品，或者选择高分辨率填料（如SP-HPR等进行优化，降低上样量等尝试优化。
c. 清洗不彻底：增加清洗的柱体积数
d. 洗杂不彻底：优化洗杂的条件，增加洗杂的柱体积数
e. 目标物出现降解：优化层析条件，选择合适的层析条件或者添加蛋白稳定剂等
f. 柱料装填效果不佳：装填的不均匀，柱效低，重新装柱
g. 分离柱顶部有较大的储样体积：装柱避免分布器离柱料上层液面太高，应保持在0.5cm高度以内。
h. 洗脱条件不佳：优化洗脱条件，比如缓慢的拉盐梯度洗脱
i. 填料分辨率下降：对填料进行清洗或者更换填料。
08 柱床有漏缝或干涸
检查系统的密闭性，避免气体进入系统，避免频繁的大幅度改变过柱流速。若出现此现象就要重新装柱。
09 洗脱峰拖尾
a. 洗脱强度不够：增大洗脱强度
b. 柱子装的均匀：重新装柱
c. 柱床上端液面太高：柱床上端液面控制在0.5cm以内。
10 目标蛋白没有洗脱下来或者洗脱下来的蛋白量较少
a. 洗脱强度不够：增加洗脱的离子强度
b. 目标蛋白在洗脱过程中发生聚集沉淀：优化洗脱条件
c. 发生非特异性结合：优化层析条件
d. 填料载量太低：更换合适的层析填料
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